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0731-89717356
| 品牌 | CNtest/中檢維康 | 供貨周期 | 一周 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 環保,食品/農產品,化工,生物產業,綜合 |
本試劑盒是應用ELISA技術研發的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較，能經濟、快速地檢測出肌肉組織、飼料、尿液等樣品中的萊克多巴胺含量。
三、交叉反應率
與類似物的交叉反應率：
萊克多巴胺…………………………………100%
沙丁安醇……………………………………﹤1%
鹽酸多巴安………………………………﹤1%
克倫特羅 ………………………………﹤1%
四、試劑盒組成
酶標板1塊，96孔/板
標準液5瓶（1 mL/瓶）：
0 ppb、0. 1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb
酶標記物 ………………………………………7mL
抗體工作液 ………………………………………10mL
底物液A ………………………………………7mL
終止液……………………..…………………7mL
10×濃縮洗滌液………………………………40mL
說明書……………………..………………1份
五、使用單位需自備的設備及試劑
（1）儀器
微孔板酶標儀(450 nm)；氮氣吹干裝置；振蕩器；離心機；渦旋儀；電子天平（感量0.01 g）。
（2）器材
容量瓶：100 mL，500 mL，1000 mL
單道微量移液器：20 μL～200 μL，100 μL~1000 μL
多道微量移液器：30 μL～300 μL
（3）試劑
甲醇、乙腈、正己烷、*、濃鹽酸、去離子水
六、溶液的配制
樣本前處理需配制：
配液1：1M NaOH溶液
稱取4.0 g NaOH加去離子水溶解，定容至100 mL。
配液2：0.1M HCl
量取0.83 mL濃鹽酸加入去離子水中定容至100 mL。
配液3：25%甲醇
量取25mL甲醇，加入到75mL去離子水中，充分混勻。
配液4：25%甲醇-0.1MHCL溶液
量取20mL 0.1M 鹽酸溶液加入到80mL 25%甲醇溶液中并充分混勻。
配液5：樣本復溶液
2×濃縮復溶液在使用前請按1：1稀釋（1份濃縮樣本復溶液+ 1份去離子水）。
配液6：洗滌工作液
10×濃縮洗滌液在使用前請按1：9稀釋（1份濃縮洗滌液 + 9份去離子水）（可按需配置）。
七、樣本前處理方法
樣本處理前須知：
（1）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（2）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。
樣本前處理步驟：
（A）組 織處理（雞、鴨、豬肌肉/肝臟、雞蛋、魚、蝦等）
處理方法一：
1、準確稱取2.0±0.02 g勻漿樣本于50 mL離心管中；
2、加入0.5mL稀釋后的樣本復溶液（配液5），充分振蕩2min，加入8mL 乙腈，充分渦旋振蕩3~5 min，室溫4000 r/min離心10 min；
3、取2.5 mL上層液體至另一離心管中，50~60℃氮氣吹干；
4、加入1 mL 正己烷溶解殘余物，再加入1mL樣本復溶液（配液5），充分混合30 s，室溫4000 r/min離心10 min；
5、去除上層正己烷，取20 μL下層液用于分析。
處理方法二：
1、準確稱取2.0±0.02 g勻漿樣本于50 mL離心管中；
2、加入6mL25%甲醇-0.1MHCL溶液，振蕩混勻3~5min，室溫4000 r/min以上離心10 min（注：若組織樣本中油脂含量較高，可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心）；
3、取1 mL上層液體至另一2mL離心管中，加入20μL 1M*溶液并充分混勻（混勻以后測定pH值，大約為7-8）；
4、 4000 r/min離心3~5 min；取上清液20 μL用于分析。
（B）尿液、血清
取20 μL清亮尿樣或血清直接測定（如尿樣或血清渾濁
必須通過過濾或4000 r/min于15℃離心10 min 直至清
亮），暫不使用的樣本應冷凍保存。
八、酶聯免疫檢測步驟
測定前須知：
1、 使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2~8 ℃。
3、 在使用中不要讓微孔干燥。
4、 在ELISA分析中的重復性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
5、 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
測定步驟：
1、 將所需試劑和微孔板從冷藏環境中取出，在室溫下平衡30 min，每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個平行試驗。
2、 加標準品/樣品：加入標準品/樣品20 μL/孔，加入酶標記物50 μL/孔，再加入抗體工作液80 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋好，室溫25℃下避光反應30 min。
3、 洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，加洗滌液 250 μL/孔，每次浸泡15~30 s，充分洗滌4~5次，用吸水紙拍干。
4、 顯色：每孔先各加入底物液A 50 μL，再各加入底物液B 50 μL，輕輕振蕩混勻，并在室溫25℃下避光反應10~15 min。
5、 測定：每孔各加50 μL終止液，輕輕振蕩混勻在酶標儀于450 nm處測定OD值（建議用450/630 nm雙波長檢測，在5 min內讀完數據）。
九、結果分析
所測得的標準液或樣品吸光度的平均值（B）除以第
一個標準液（0標準液）的吸光度（B0）值再乘以100%，
得到百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝
以標準品濃度的10為底的對數為X軸， 百分吸光值為Y軸，繪制標準曲線。將樣本的百分吸光值代入標準曲線，從標準曲線上讀出樣本所對應的值，作為10的冪，乘以稀釋倍數，即為樣品中所含萊克多巴胺的量。
利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
十、樣本稀釋倍數
動物組織：2倍（方法一）、4倍（方法二）
尿液、血清樣品：1倍
十一、試劑盒靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0. 1ppb
樣本檢測限：
組織樣品（方法一）…………………0.2ppb
組織樣品（方法二）…………………0.4 ppb
尿液、血清樣品………………………0.1ppb
回收率：
組織樣品 …………………………75±20%
尿液、血清樣品………………………95±20%
精密度：試劑盒的變異系數均小于10%
十二、注意事項
1、室溫低于20 ℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20~25 ℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象，所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
4、保存試劑盒于2~8 ℃，不要冷凍，將不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
5、顯色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。
6、在加入底物液后，一般顯色15 min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20 min（或更長），但不得超過30 min；反之，則減短反應時間。
十三、貯藏條件及保存期
貯藏條件：在2~8 ℃保存試劑盒。
保存期：本試劑盒有效期為12個月。